1.1材料

试验材料取自2017年济南市唐王和长清苗圃采收的大叶女贞种子，选择颗粒饱满的种子消毒后剥胚放在垫有湿润脱脂棉的培养皿中，于25℃组培室中萌发。

1.2方法

1.2.1染色体制片分别选取大叶女贞根尖和茎尖为材料，在7:00-12:00时间段内分次取样，每隔30min取材1次，确定最适宜的取材时间。材料分别经0.02%秋水仙素、0.002mol/L8-羟基喹啉、饱和对二氯苯、冰水处理2～8h，2h为一个梯度，确定最适宜的预处理液和预处理时间。预处理后，蒸馏水漂洗2～3遍后于卡诺式固定液中室温固定24小时。蒸馏水漂洗2-3遍，分别经酶解法和酸解法解离，酸解时间分别为5～25min，5min为一个梯度。酶解法时，选择有无0.075mol/LKCl低渗液两组处理，酶解时间分别为90～150min，10min为一个梯度。以确定最适宜的解离方法和时间。解离后，蒸馏水冲洗2～3遍，将材料于载玻片上，滤纸吸干周围的水分，滴加1～2滴醋酸洋红或卡宝品红染液，分别染色5min，15min，25min，以确定 染色时间。染色后，运用常规压片法和改良去壁火焰干燥法制片。

1.2.2细胞学观察及数据分析

选取5～10个植株的新生根尖进行核型分析，使用OLYMPUS显微镜100倍油镜进行镜检并拍照。运用AdobePhotoshop图像处理软件，对分裂中期的大叶女贞染色体进行数据测量并计算染色体组总长度、染色体臂相对长度、臂比、臂指数、不对称系数等参数。染色体数目的确定和核型分析参照李懋学和陈瑞阳关于植物核型分析标准化建议，参照Levan等的染色体命名规则描述核型公式；按Arano方法计算核不对称系数；按Kuo等等方法计算相对长度；按Stebbins方法确定染色体类型。